protein a亲和捕获-纳微科技-层析介质

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    2020-7-27

任红茹
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层析介质功能基团对生物分离性能的影响

   功能基团的物理和化学性能是影响层析介质与目标分子的作用的主要因素,主要决定了生物分离模式并影响其分离的选择性和载量,因此选择合适功能配基及密度尤其重要。另外配基与基球表面距离也会影响其介质的分离性能,配基与基球表面距离可以通过链接配基和基球的手臂分子来调节。




---分离纯化的挑战与解决方案

 ---结构通常由蛋白质为衣壳及---为内芯组成,其尺寸在20-100纳米之间,与单一蛋白或---生物分子相比其结构复杂得多,分子量也大很多。因此用于蛋白分离纯化的层析介质很难满足---的分离纯化的要求。主要原因是---尺寸大,而传统蛋白分离纯化的介质孔径小,因此---在传统层析介质的扩散速度慢,---在常规蛋白层析介质上的吸附只限于外表面一薄层区域,导致载量低,protein a亲和捕获,并使得---在操作中大量失活。为了满足---分离纯化需求,疏水层析介质,纳微开发出三种---分离纯化介质及解决方案,分别为---孔单分散聚合物层析介质用于---分离纯化;小粒径无孔层析介质分离纯化---;孔径均一的整体柱分离纯化---。


为了解决传统整体柱制备技术难题,纳微------材料合作开发出孔径及孔隙率可精l确控制的新方法(tantti整体柱)。这种方法是利用单分散聚合物微球为模板填充在整体柱中,然后把单体及交联剂填充到微球的空隙中,加热聚合后,再把模板微球清洗掉留下尺寸与微球模板大小一致的多孔整体柱。整体柱的孔径大小可以通过模板微球大小进行精l确调节,不受反应条件影响,因此,柱与柱重复性好,且容易放大生产等。以单分散微球为模板制备孔径可以精l确控制整体柱的孔径大小,克服了传统整体柱制备方法依靠相分离形成孔道结构不稳定的缺陷。这种---的整体柱将---提升其---的分离纯化性能,甚至为---、---类(疫l苗)、腺伴随---(aav)等生物大分子的分离纯化带来---性的影响。




---孔单分散聚合物层析介质用于---分离纯化

传统生物层析介质不能有效用于---分离纯化很主要的原因是其孔径太小,---不能扩散到传统层析介质的内孔里,因此可及比表面积低,吸附载量低,而---孔单分散层析介质由于粒径均匀,孔径大(>;400 纳米)因此---可以有效的扩散到孔内部空间,使得静态吸附载量大幅度提升。---孔结构还可以有效降低---与填料表面配基之间多位点结合,层析介质,避免亚基的解聚,使得---结构稳定性得到大幅度的提高。另外---孔聚合物层析介质用于---及类---(疫l苗)分离纯化的优点是其分离模式与传统生物制药层析分离纯化方法基本一样,容易放大生产,重复性好。但---孔层析介质制备技术难度大,且其机械强度差,耐压性差,容易破碎,连续流层析,导致筛板堵塞,压力升---缺点。虽然纳微已经可以制备孔径大于---800纳米的---孔径聚合物微球,但要满足------分离纯化,还需要进一步解决---孔微球机械强度问题。

以下为纳微---孔径deae离子交换层析介质在流l感---(h5n2)纯化中的数据,结果显示---孔介质对流l感---的分离纯化比传统层析介质具有明显的优势。






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