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抗l体的层析分离步骤基本都可以采用标准化的三步曲：步用protein a介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余dna，endotoxin，protein a 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的protein a亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是protein a 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，protein a使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，protein a亲和捕获，protein a 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步protein a 亲和捕获。
---之三：高度交联聚丙l---酯基球替代软胶或低交联的聚丙l---酯基球 高机械强度介质不仅可以耐受更高流速、更高压力、粘度样品，还可以装更高的柱床，以增加抗l体批处理量、提高抗l体生产效率、减少设备投资、减少厂房占用面积。因此纳微protein a 介质是选择高度交联的聚丙l---酯基球，与市场上以琼脂糖或低交联度聚丙l烯l酸酯为基球生产的protein a 介质相比具有溶胀系数小、压缩比例低、而且机械性能强。实验证明 unimab在2公斤装柱压力下，其柱床压缩比例只有5%，而无论是ge 生产的以琼脂糖为基球还是tosoh 生产的低交联聚合物为基球的protein a 介质压缩比例往往超过15%。
分离纯化抗l体的目的。野l生型protein a蛋白是金黄色葡l萄球菌细胞壁锚钉蛋白。三维空间上，抗l体fc端ch2-ch3区域与protein a蛋白b结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。因此protein a与抗l体分子---是与igg1、igg2、igg4有特---结合，连续流层析，使得抗l体分子与发酵液中不具fc端结构的杂质如宿主蛋白与---等有效分离，进而达到纯化目的。protein a 亲和层析介质是通过把proteina 配基偶联到微球介质上制备而成的。因为protein a配基与目标抗l体的作用的专一性，因此亲和层析的分离纯化工艺和方法与抗l体样品杂质含量和种类多少影响不大，使用protein a 介质一步纯化目标抗l体就可以达到95%以上纯度，回收率达到90%以上。亲和纯化效率也基本不受杂质多少影响，而其它分离模式如离子交换，疏水，分子筛等的分离工艺方法及效率大多取决于与目的蛋白同时存在的杂质种类和含量。因此，只要样品杂质不同，即使是纯化同样的目标生物分子，采用的分离工艺和方法就不同。以重组---分离纯化为例，不同厂家虽然生产的是同一目标---，层析介质，但采用分离纯化方法完全不一样，protein a 介质，主要原因就是每家生产的---杂质组成和含量不一样，因此需要不同的纯化工艺。而比---分子量，结构更复杂的抗l体基本可以采用标准化的三步曲，主要原因就是protein a 亲和介质的出现---简化抗l体的分离纯化工艺，但protein a 价格昂贵让抗l体生产厂家爱恨交加。
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