分离纯化服务-分离纯化-纳微科技股份有限公司

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    2020-8-29

任红茹
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抗l体药l物的生产工艺进展  

  抗l体药l物生产是个非常复杂的过程,大致分为上游的发酵及下游的分离纯化:上游工艺主要包括细胞复苏、传代、发酵生产。而下游工艺主要包括膜过滤及多步层析分离纯化。过去十多年来,基因工程获得突飞猛进的进步,细胞培养的表达量从原来的不到0.5 g/l 到现在普遍达到5g/l,分离纯化服务,有的甚至超过10g/l。这些进步是由细胞表达载体的开发,克l隆筛选以及细胞培养基优化等技术---所驱动的。由于发酵产率的大幅度提升,使得上游细胞培养成本大幅度降低(表1)。




---相对于宏观物质甚至与---相比都是极其微小的生物体,但与传统蛋白及---生物分子相比,下游分离纯化瓶颈,其尺寸又大很多,结构也复杂得多。---结构通常由蛋白质组成外衣壳,抗体分离纯化,由---组成内芯,因此比蛋白和---分子都要复杂很多。---尺寸一般在20-100纳米之间,而---尺寸一般在1000纳米以上,蛋白分子尺寸往往在10纳米以下。人们只能借助电子显微镜才能看到---的结构和形貌。虽然多肽,蛋白,---等生物大分子都有成熟的分离纯化方法,但---到目前也没有一个比较理想的分离方法。





以纯化溶瘤---为例,由于其在生产过程中存在宿主蛋白等杂质,纯化前 sec测试纯度为6.5%。纯化采用两种基质相同的介质,其表面化学功能也很一致,主要区别是前者是无孔实心的层析介质,而后者是传统的多孔层析介质。层析纯化的方法是阴离子交换吸附然后梯度洗脱(bind-elute)模式。从层析图谱可以看出,分离纯化,在洗脱及cip过程中无孔介质洗脱杂质更小,峰值---,意味着上样过程中结合的杂质会更少,有利于表面结合的---分子纯化。通过对层析洗脱液sec纯度分析比较,发现用传统的多孔层析介质实验得到的---样品纯度为54%(图 ),而用无孔的同类型介质实验得到的---纯度达到接近90%(图 )。






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