下游分离纯化瓶颈-纳微科技-分离纯化

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    2020-9-13

任红茹
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分离纯化抗l体的目的。野l生型protein a蛋白是金黄色葡l萄球菌细胞壁锚钉蛋白。三维空间上,抗l体fc端ch2-ch3区域与protein a蛋白b结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。因此protein a与抗l体分子---是与igg1、igg2、igg4有特---结合,使得抗l体分子与发酵液中不具fc端结构的杂质如宿主蛋白与---等有效分离,进而达到纯化目的。protein a 亲和层析介质是通过把proteina 配基偶联到微球介质上制备而成的。因为protein a配基与目标抗l体的作用的专一性,因此亲和层析的分离纯化工艺和方法与抗l体样品杂质含量和种类多少影响不大,使用protein a 介质一步纯化目标抗l体就可以达到95%以上纯度,回收率达到90%以上。亲和纯化效率也基本不受杂质多少影响,下游分离纯化瓶颈,而其它分离模式如离子交换,疏水,分子筛等的分离工艺方法及效率大多取决于与目的蛋白同时存在的杂质种类和含量。因此,只要样品杂质不同,即使是纯化同样的目标生物分子,采用的分离工艺和方法就不同。以重组---分离纯化为例,不同厂家虽然生产的是同一目标---,但采用分离纯化方法完全不一样,主要原因就是每家生产的---杂质组成和含量不一样,因此需要不同的纯化工艺。而比---分子量,结构更复杂的抗l体基本可以采用标准化的三步曲,主要原因就是protein a 亲和介质的出现---简化抗l体的分离纯化工艺,但protein a 价格昂贵让抗l体生产厂家爱恨交加。

用于传统小分子的分离方法如重结晶、精馏等对生物分子具有破坏性,因此基本上不能用于生物大分子分离纯化,使得生物大分子的分离面临---挑战。层析技术具有---的分离纯化效率,分离纯化,且条件温和,在分离纯化过程中容易保持生物分子的活性,因此层析技术已成为生物分离的主要的工具。层析分离过程是把混合样品从装有层析柱的一端进去,抗体分离纯化,由于不同生物分子其尺寸、电荷、疏水等物理性能有差异,抗体生产效率,使得其与层析柱填充的介质作用力(或吸附强度)不同,导致不同分子在层析柱保留时间不同,因此不同组分的分子可以按顺序从柱子另外一端流出来以达到分离的目的。层析分离效果主要取决于其层析柱中的层析介质微球。由于层析分离纯化技术牵涉到材料、生物、化学等交叉技术领域,因此层析介质制备技术门槛高,用于生物分离的层析介质基本依赖进口。




生物分子的分离可以根据其尺寸大小、表面电荷、疏水性能、及与配基的亲和作用性能的差异分别采用分子筛,离子交换,疏水,亲和等层析分离模式。为了率把目标生物分子从复杂样品里分离出来,并保持其生物活性,用于分离纯化的层析介质材料必须满足苛刻的要求。层析介质的性能主要取决于其介质材料组成、形貌、粒径大小、粒径分布、孔径大小和分布、功能基团、及表面亲水性能等。



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